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純化回收

發布者:莊盟生物發布時間:2015-04-01浏覽次數:3560次
■純化回收簡介

采用矽基質材料在高鹽條件下特異地與DNA結合,從而去除雜質。在低鹽條件下洗脫DNA得到高純度DNA。本公司所使用的矽基質吸附材料及玻璃奶吸附材料,能夠有效的去除蛋白、鹽類及有機物質。


凝膠回收常見問題分析
未回收或回收率低
  1. 膠塊未全部溶解:溶解凝膠時應置于55℃水浴,期間上下颠倒混勻數次,确定膠塊完全溶解後再進行下一步驟。
  2. 膠塊太大(>400 mg):如果需要處理的膠塊太大,應先将其切成小塊,然後分兩次回收。
  3. 電泳緩沖液pH值太高:矽膠膜在高鹽及低pH值(pH≤7.5)時可結合DNA,在低鹽及高pH值(pH≥8)條件下洗脫。如果電泳緩沖液pH值太高,會導緻DNA無法結合或降低結合率。可在溶膠後加入3M乙酸鈉(pH 5.0)10μl,将pH值調至7.5以下。
  4. 漂洗液中未加無水乙醇:第一次使用前應在漂洗液中加入無水乙醇。漂洗液每次用後應擰緊瓶蓋,以免乙醇揮發,降低回收率。
  5. 洗脫緩沖液不合适:DNA隻在低鹽溶液中才能被洗脫,如試劑盒中的洗脫緩沖液TE (10 mM Tris·Cl, pH 8.5)或水。洗脫效率還與pH值有關。最大洗脫效率在pH 7.08.5間。當用水洗脫時請确保其pH值在此範圍内。
  6. 洗脫緩沖液未加在離心柱中間,尤其使用較少量洗脫緩沖液時:應滴加在離心柱正中間,并放置12分鐘,再離心。